DNA純化回收常見問題分析
1、DNA產量低或者純度不高
原因分析:漂洗液中沒有加無水乙醇
建議解決方法:第一次實驗時,在漂洗液中加入指定量的無水乙醇。
原因分析:試劑盒儲存在非最佳條件
建議解決方法:試劑盒存放在室溫(15℃-20℃)。
原因分析|:使用了非最佳的洗脫液
建議解決方法:使用本試劑盒配套的洗脫液。
原因分析:試劑和回收液沒有充分混勻
建議解決方法:加入每個試劑后都要充分混勻。
原因分析:使用的結合液不足
建議解決方法:確保回收液體積和結合液的比例是1:5。
原因分析:洗脫不完全
建議解決方法:使用2次洗脫緩沖液洗脫,合并兩次洗脫液。
原因分析:起始的處理材料中DNA含量太低
建議解決方法:加大處理量,但注意不要少于30ul。
原因分析:回收的片段小于100bp或者大于10kb
建議解決方法:片段小于100bp或者大于10kb回收效率都會迅速降低,可嘗試提高起始處理量。
2、DNA下游酶切不能切開或者酶切不完全
原因分析:緩沖液或者試劑暴露于減少它們有效性的條件下
建議解決方法:儲存在室溫(15℃-20℃)。每次用完后立刻蓋緊蓋子,以免溶液蒸發、pH改變和污染。
原因分析:乙醇抑制了酶切反應
建議解決方法:盡量除去漂洗液,空氣中晾幾分鐘,讓殘留乙醇揮發。
3、洗脫液中不含DNA
原因分析:一些硅基質膜成分一起洗脫下來,抑制了酶切反應
建議解決方法:將洗脫的DNA溶液13000rpm再離心一分鐘,小心取上清使用。
原因分析:在初始處理材料中沒有PCR產物
建議解決方法:開始回收前,用瓊脂糖凝膠/EB電泳檢測PCR產物。
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