1、未提取到質粒kDNA或質粒DNA產量低

可能的原因：培養基中未加入抗生素

建議解決方法：請確保固體、液體培養基中都加入了適當的抗生素，避免非質粒轉化細胞過度生長。

可能的原因：細菌培養時間過長

建議解決方法：將接種過夜培養板的新鮮單菌落，加到含有合適抗生素的培養基中培養12-16小時，避免培養時間過長導致老化細菌裂解。

可能的原因：細菌培養時間過短

建議解決方法：細菌培養到[A600]吸光值為2~4小時才收集菌體，避免培養時間過短導致細菌濃度過低。

可能的原因：質?？截悢档?/span>

建議解決方法：建議使用高拷貝數質粒，地拷貝數質粒應該適當加大處理體積。

可能的原因：細菌細胞裂解不完全

建議解決方法：使用建議的菌體處理量處理菌體；渦旋或者吹打，確保菌體充分重懸于溶液P1中；確保加入了裂解液P2。

可能的原因：分光光度計定量不準確

建議解決方法：分光光度計進行產量定量結果常常偏高，可使用瓊脂糖電泳/EB染色方法進行定量。

可能的原因：漂洗液WB中未加無水乙醇

建議解決方法：漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，使質粒DNA吸附于硅膠基質膜上。

可能的原因：核酸酶含量及活性高

建議解決方法：使用去蛋白液PE去除核酸酶。

2、質粒DNA有缺口或者電泳上超螺旋帶前出現變性質粒帶

可能的原因：裂解步驟時間過長

建議解決方法：裂解時間不要超過5分鐘。

3、質粒DNA純度不高

可能的原因：混雜有基因組DNA污染

建議解決方法：做裂解操作時輕柔的顛倒混勻，不要渦旋或者劇烈震蕩。

可能的原因：產物中含有RNA污染

建議解決方法：第一次實驗前確保將RNase A加入了溶液P1；P1溶液超過3個月的，可加入一些新RNase A在溶液P1；處理量不要過量；菌體重懸于P1溶液后可放置幾分鐘讓RNase A充分起作用后再繼續實驗。

如果您還有其他技術疑問，歡迎隨時撥打技術熱線：010-52609502轉8007；也可把您的技術問題發送到技術部郵箱：[email protected]。