M-MLV One-Step RT-qPCR(Probe) Kit
?【試劑盒組成】
組分 | MT701-01 (20?μl×100?rxns) |
2?×One-Step?RT-qPCR?Buffer | 1?ml |
?Taq HS(5U/μl) | 40 μl |
RT Enzyme Mix | 40 μl |
H2O(RNase?free) | 1?ml |
【貯藏及有效期】??試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為 12 個月
【產品簡介】
采用了探針法 (TaqMan) 一步RT-qPCR?方案。反轉錄與qPCR?反應在同一反應體系中連續進行，反應中不需添加任何試劑，操作簡?單，并能有效防止污染。RT Enzyme Mix含有反轉錄酶與RNA酶抑制劑，Taq HS(5U/μl)為抗體修飾的Taq酶，具有熱啟動，檢測精確度更高，靈敏度更高的特點。本制品可以在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線，對多種豐度的靶基因進行準確定量檢測，重復性好，可信度高。
【產品特點】
1.RT Enzyme Mix含有反轉錄酶與RNA酶抑制劑，可對微量RNA進行反轉錄。
2.qPCR使用了Taq HS(5U/μl)，可以進行熱啟動法PCR反應，與產品Buffer系統結合，具有擴增效率高，靈敏度高的特點。
3.只能使用特異引物，不能使用Oligo(dT)和Random?Primer。
【使用方法】
配制反應體系
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成分 | 體積 | 終濃度 |
2×One-Step?RT-qPCR?Buffer | 10 μl | 1?× |
Taq HS(5U/μl) | 0.4 μl | |
RT Enzyme Mix | 0.4 μl | |
PCR Forward?Primer??(10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM *1 |
PCR Reverse?Primer??(10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM *1 |
Probe | 0.4 μl*2 | |
RNA模板 | 2 μl*3 | |
H2O(RNase?free) | To 20 μl |
*1 通常引物終濃度為 0.2 μM?可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在 0. 1~1.0?μM?范圍內調整引物濃度。
*2 探針濃度與使用的 Real?Time?PCR?擴增儀、探針種類、熒光標記物質種類有關，實際使用時請參照儀器說明書，或各熒光探針?的具體使用要求進行。
*3 模板使用量依據具體實驗而定，建議RNA?使用量在10?pg- 100?ng。
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實驗圖例
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