蛋白印跡膜再生液Stripping Buffer
保存條件:本產(chǎn)品收到后按照上面指示溫度存放各成份,12個(gè)月內(nèi)有效。
產(chǎn)品介紹:
蛋白印跡膜再生液,用于 Western blot中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在 Western blot 中完成抗體孵育和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后,有時(shí)還需要檢測、Actin 、Tubulin 等表達(dá)量相對穩(wěn)定的蛋白作為參照,或檢測其它蛋白進(jìn)行比較。通過使用蛋白印跡膜再生液中特殊成份解離抗體和印跡膜上抗原的結(jié)合從而去除抗體,即可非常方便地重新利用同一張膜檢測其它蛋白。與重新跑一個(gè)SDS-PAGE膠,不僅省時(shí)省力,而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使可比性更強(qiáng)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.理想的再生液應(yīng)該是洗脫抗體的同時(shí),不洗脫膜上結(jié)合的蛋白或者改變抗原的結(jié)合性質(zhì),但是目前沒有一種再生液可以做到只洗脫抗體,而完全不洗脫膜上結(jié)合的抗原。也沒有一種再生液可以適用于所有不同親和度的抗原抗體復(fù)合物,太強(qiáng),則抗原也容易 被洗脫;太弱,則抗體殘留太高。本試劑盒配備了兩種適用不同親和力抗原抗體復(fù)合物的配方(Strong buffer 和Mild buffer),用戶可以根據(jù)自己抗原抗體結(jié)合強(qiáng)度選用。
2.傳統(tǒng)分子克隆上介紹的方法對抗原洗脫強(qiáng)度過大,常常會(huì)導(dǎo)致蛋白信號的減弱。本公司的本再生液為獨(dú)有的配方,效力強(qiáng),但是對蛋白作用溫和,經(jīng)過多個(gè)抗體的檢測試驗(yàn),通常可以重復(fù)利用膜5次或者更多。
3.不含有常用的β-巰基乙醇,沒有異味,操作簡單快速,室溫進(jìn)行,最快15-20min就可以完成全過程。
注意事項(xiàng):
1.本試劑盒里面包括兩種配方的再生液(strong buffer 和 mild buffer),大家可以根據(jù)自己使用抗體和抗原的親和度選用,但是兩種再生液不可以混合在一起使用。
2.再生液使用后應(yīng)該立刻蓋緊蓋子,避免長時(shí)間和空間接觸導(dǎo)致pH和質(zhì)量改變,影響使用效果。
3.Strong buffer 有輕度腐蝕性,為了您的安全,請帶乳膠手套操作,如果不小心濺入眼睛,請用大量清水沖洗。
4.為了達(dá)到最佳效果,推薦使用PVDF膜,尤其strong buffer對PVDF膜效果更好。
5.適用于 ECL和類似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western 檢測。不適用于非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western檢測,例如DAB,NBT/BCIP。
6.需要再生的膜如果干了,則洗脫效率非常低,因此如果決定要做膜再生,應(yīng)該做完底物化學(xué)發(fā)光后,立刻將濕潤狀態(tài)的膜放入PBS中4℃保存直到開始再生過程。
7.在實(shí)踐應(yīng)用中,我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)候部分親和力很弱的抗原抗體,用strong buffer效果反而比mild buffer差,有時(shí)候親和力很強(qiáng)的抗體,用mild buffer效果卻更好。因此,實(shí)際過程中,親和力強(qiáng)的抗體,即使strong buffer效果不好,也一定要試試mild buffer 是否效果更好。
(具體操作詳見說明書)